Još jedna godina je iza nas. U mnogočemu je bila lijepa i uspješna. Otvorili smo nova poglavlja projekta i usavršili započeta: odradili smo prijenos GLRaV-3 s  donorskih na bezvirusne domaćinske biljke vinove loze, usavršili smo RT-PCR i serološka testiranja na prisutnost GLRaV-3, mjerili  smo morfološke, fiziološke i biokemijske parametre stresa, sve bolji smo u prepoznavanju simptoma virusne infekcije na različitim domaćinskim biljkama, u molekularni laboratorij imamo NanoDrop najnovije generacije.

No, nije uvijek bilo lako. Naročito nakon proglašenja pandemije COVID-19, karantenskih uvjeta i rada od kuće, pauziranja s nabavkom materijala za projekt i odgođenim konferencijama. Ali sve smo izdržali i sve smo napravili, sa smiješkom ispod maske.

U nadi i želji da što prije skinemo maske, da se družimo, posjećujemo i putujemo kao i ranije, da  širimo ideje, znanje i rezultate više off- nego on-line, čestitamo Božić i Novu 2021! Živjeli!

GRAPE-PATH3 tim

Razvoj simptoma Virusa uvijenosti lista vinove loze 3 kroz mjesec dana na ukorijenjenim biljkama Cabernet Sauvignona

Simptomi GLRaV-3 su vidljivi u obliku lisnog crvenila koje se u početku javlja na manjim površinama lista. Širenjem zaraze čitav list postaje crven, dok jedino lisne žile ostaju zelene. Listovi se uvijaju prema svom naličju. Simptomi najprije zahvaćaju starije listove, a kako se zaraza širi, crvenilo i uvijanje listova postaju uočljivi na čitavoj biljci.  

Povratak u laboratorij

Nakon ljetnog odmora, opet smo u laboratoriju!  Sa suradnicima provodimo morfološke i fiziološke analize na zdravim i GLRaV-3  zaraženim biljkama.  Analiziramo porast biljaka,  permeabilnost membrana, sadržaj vode i nutrienata u listu, enzime i hormone stresa, te još puno toga. Ovo je i vrijeme kada se na biljci mogu jasno razaznati promjene tipične za zarazu GLRaV-3.

Proljetne i ljetne aktivnosti na projektu

Kako bi provjerili uspješnost prijenosa virusa cijepljenjem, u Mikrobiološkom laboratoriju koristili smo ELISA metodu (Engl: Enzyme-linked immunosorbent assay)  za  detekciju GLRaV-3 virusa. Radi se o serološkoj metodi koja omogućuje detekciju virusnih antigena u uzorku ukoliko je titar virusa zadovoljavajući. Iako smo uspješno primijenili metodu, poželjno vrijeme detekcije virusa u biljci je zimski period, a tip uzorka floemsko tkivo rozgve, pa ćemo ovo testiranje ponoviti u zimskom periodu tj u fazi mirovanja vinove loze.

U međuvremenu smo nacijepili manji broj zdravih indikaorskih biljaka, dosad neiskorištenih, s odabranim izolatima GLRaV-3 iz polja. Tip cijepljenja kojeg smo primijenili je “zeleno na zeleno”. Biljke su već nakon dva dana počele razvijati pup iz umetnutog dijela što je garancija prijenosa virusa iz donorske biljke na indikatorskog domaćina.

U drugoj polovici srpnja započeli smo mjeriti fotosintezu na biljkama u pokusu. Nadamo se da će inficirane biljke pokazati razlike u fotosintetskoj aktivnosti u odnosu na kontrolne neinficirane biljke. Također se nadamo da će se pokazati razlike  u aktivnosti fotosinteze  između različitih izolata GLRaV- 3 kao i između različitih domaćinskih biljaka inficiranih istim izolatima.  Značajne…?! Vidjet ćemo.. 🙂

Inokuliranje vinove loze GLRaV-3 izolatima

Početkom ožujka inokulirali smo četiri sorte vinove loze  različitim izolatima GLRaV-3. Biljke smo individualno zarazili inokulumom koji je sadržavao samo jednu genetičku varijantu GLRaV-3 (monofiletski izolati) i kombinacijom genetskih varijanti (polifiletski izolati). Jedan dio biljaka zaražen je i miješanim virusnim izolatima sastavljenim od GLRaV-3 i ali i drugim virusima koji su najzastupljeniji u dalmatinskim autohtonim sortama vinove loze. Ukupno smo cijepili oko 300 biljaka. Dio biljaka je ostao je neinokuliran i služit će kao kontrolne biljke. Ovaj pokus postavljen je da bi se mogle ispitati biološke karakteristike genetskih varijanti GLRaV-3, njihovih kombinacija i karakteristike poljskih izolata te da bi se razjasnilo ponašanje GLRaV-3 virusa i njegovih varijanti u smislu replikacije u domaćinskim biljkama i odgovora domaćina na virusnu zarazu.

2019 godina bliži se svome kraju, isto kao i prva godina GRAPE-PATH3 projekta. Bila je ovo dobra godina! Naš tim sada je bogatiji za jednog novog člana, doktoranda Matu. Naš laboratorij je opremljen s modernim i sigurnim UV-sistemom za dokumentaciju gela, ELISA-čitačem te sustavom za vertikalnu elektroforezu. Biljke nam rastu u novo-servisiranoj vegetacijskoj komori. Imamo rezultate virusne distribucije u autohtonim sortama vinove loze te rezultate populacijske strukture GLRaV-3 virusa. I još puno više.. A najvažnije od svega je da smo uživali stvarajući nove rezultate zajedno!

Sretna Nova godina! Sretno s  radom, s novim rezultatima i projektima!

Tim GRAPE-PATH3

Izlaganje na Sabatini

Dr. sc. Katarina Hančević je 08. studenog  sudjelovala kao predavač na tradicionalnom 29. međunarodnom susretu vinara i vinogradara Sabatina 2019, u organizaciji Zadružnog saveza Dalmacije, koje se održalo u Segetu Donjem pokraj Trogira.

Izlaganje pod naslovom: “Patogenost virusa vinove loze u autohtonim dalmatinskim sortama” je bilo u sklopu znanstveno-stručnog skupa u organizaciji Agronomskog fakulteta u Zagrebu. Dio izlaganja bio je posvećen prezentaciji HRZZ projekta GRAPE-PATH3.

Dragoj kolegici s Instituta i suradnici na projektu, dr. sc. Ani Mucalo je na Sabatini uručena  povelja “Zlatan Plenković” za mladog vinogradarsko-vinarskog stručnjaka koju joj je dodijelio “Zlatan otok” iz Svete Nedjelje. Iako ova zaslužena nagrada nije povezana s projektom, ovom prilikom Ani čestita cijeli GRAPE-PATH3 tim!

Loader Loading…
EAD Logo Taking too long?

Reload Reload document
| Open Open in new tab

Priprema virusnih inolukuma za cijepljenje indikatorskih biljaka

Biljke vinove loze iz kolekcijskog nasada kod kojih smo dokazali prisustvo GLRaV-3 virusa smo ukorijenili i rasadili za potrebe biološkog indeksiranja. Budući da kod ispitivanih loza nismo detektirali sve genetske varijantne GLRaV-3 u samostalnoj infekciji, pojedine monofiletske varijante GLRaV-3 kojima ćemo inficirati indikatorske biljke smo pribavili ljubanošću dr. sc. Rachelle Bester sa fakulteta  Stellenbosch (Department of Genetics) iz Južnoafričke Republike.  Te reznice čekaju proljeće sljedeće godine kada će biti cijepljene na uzgojene indikatorke biljke.

Zapažanje simptoma virusne infekcije u nasadu

Paralelno s laboratorijskim analizama genetske raznolikosti GLRaV-3  virusa kojeg smo detektirali u autohtonim sortama, od proljeća pratimo pojavu i intenzitet simptoma svih virusnih oboljenja na lozama u kolekcijskom nasadu. Prve simptome koje smo uočili su bili žućenje i lepezastost listova koji se povezuje s virusima iz skupine infektivne degeneracije.  Dolaskom ljeta počeli su se razvijati simptomi crvenila listova između lisnih žila kod loza zaraženih virusima iz skupine virusa uvijenosti listova. S vremenom su ti listovi postajali sve crveniji te su se počeli i uvijati. Upravo zbog tog simptoma virusi uvijenosti listova opravdano nose dano im ime.