Zajedno s kolegama, aktivno smo sudjelovali  na Festivalu znanosti koji se ove godine održao od 10. do 15. svibnja. U Institutu za jadranske kulture pripremili smo virtualnu radionicu putem platforme ZOOM, u petak, 14. svibnja. Kroz zajedničku aktivnosti: Mediteranska poljoprivreda i šumarstvo – istraživanja na Institutu za jadranske kulture i melioraciju krša nastojali smo približiti znanost djeci i odraslima na način da im pomognemo shvatiti koliko je znanost kojom se mi u Institutu bavimo, važna i sveprisutna u današnjem društvu te ljudskim životima. Naš tim je sudjelovao s podtemom “ Virusi vinove loze“ gdje je Mate na znanstveno-popularan način prezentirao o spoznajama i važnosti virusa  za vinovu lozu, te važnost istraživanja kojeg obavljamo na projektu GRAPE-PATH3!

Emanuel Gaši je 13. svibnja  2021 uspješno obranio diplomski rad naslova „Učinak virusa uvijenosti lista vinove loze 3 na indikatore stresa u vinovoj lozi“ na Prirodoslovno-matematičkom fakultetu u Zagrebu.  Voditeljica mu je bila Prof. Sandra Radić Brkanac, suradnica na projektu, pod čijim mentorstvom je Emanuel napravio laboratorijske analize uzoraka vinove loze iz našeg pokusa te pripremio diplomski rad. Članovi komisije za obranu diplomskog rada su rad ocijenili s najvišom ocjenom. Čestitamo Emanuelu na odličnom radu i prezentaciji  kao i njegovoj mentorici! Ovo je ujedno prvi diplomski rad izrađen u sklopu GRAPE-PATH3 projekta, a mi se nadamo će ih biti još!

U periodu od 19 do 24. travnja održan je drugi dio obuke doktoranda Mate Čarije na Biološkom odsjeku PMF-a u Zagrebu za rad na detekciji i kvantifikaciji različitih virusa vinove loze metodom Real-time PCR.  Detektirali smo viruse u drugoj vremenskoj točci u 3 vrste indikatorskih  biljaka i sorti Tribidrag, koje su sve cijepljene poljskim izolatima, već ranije utvrđenog virusnog sastava. Također smo u tim infekcijama kvantificirali GLRaV-3.  Kao i tijekom prvog dijela obuke, usavršavanje  je vodila dr. sc. Silvija Černi, suradnica na projektu GRAPE-PATH3. 

U sklopu aktivnosti diseminacije rezultata projekta, doktorand Mate Čarija sudjelovao je na online kongresu International Advances in Plant Virology u organizaciji Association of Applied Biologists sa sjedištem u Engleskoj. Naslov njegove poster prezentacije je Screening for grapevine viruses and GLRaV-3 genetic diversity in the most appreciated Croatian red indigenous cultivar Plavac Mali. Sažetak će biti objavljen u zborniku radova i sažetaka, a najzanimljivija predavanja možete naći na poveznici: https://www.youtube.com/channel/UC3yiNfbNqoKPqR15zqxTwAg

Odlaskom Mate Čarije na usavršavanje kod suradnice na projektu doc.dr. sc. Silvije Černi s Biološkog odsjeka PMF-a u Zagrebu, započeli smo s novom aktivnosti na projektu. Lančana reakcija polimerazom u stvarnom vremenu (engl. real-time PCR) je pouzdana i precizna metoda za određivanje i kvantifikaciju specifičnih molekula DNA. U našem timu po prvi puta smo koristili ovu metodu kako bi detektirali specifične dijelove virusne DNA te kako bi kvantificirali GLRaV-3.  Obuka je odrađena na aparatu Applied Biosystems 7300 Real-Time PCR System,  a trajala je od 17. do 23. veljače. U sklopu obuke, odrađen je jedan set uzoraka biljaka iz pokusa.

Prvi znanstveni rad u sklopu projekta GRAPE-PATH3 na temu rasprostranjenosti i učestalosti virusa u autohtonim sortama vinove te genetske varijabilnosti GLRaV-3 virusa objavljen je u časopisu Plants (IF= 4,658; Plant Sciences) Cjeloviti rad možete pogledati  na:

https://doi.org/10.3390/plants10010017

Još jedna godina je iza nas. U mnogočemu je bila lijepa i uspješna. Otvorili smo nova poglavlja projekta i usavršili započeta: odradili smo prijenos GLRaV-3 s  donorskih na bezvirusne domaćinske biljke vinove loze, usavršili smo RT-PCR i serološka testiranja na prisutnost GLRaV-3, mjerili  smo morfološke, fiziološke i biokemijske parametre stresa, sve bolji smo u prepoznavanju simptoma virusne infekcije na različitim domaćinskim biljkama, u molekularni laboratorij imamo NanoDrop najnovije generacije.

No, nije uvijek bilo lako. Naročito nakon proglašenja pandemije COVID-19, karantenskih uvjeta i rada od kuće, pauziranja s nabavkom materijala za projekt i odgođenim konferencijama. Ali sve smo izdržali i sve smo napravili, sa smiješkom ispod maske.

U nadi i želji da što prije skinemo maske, da se družimo, posjećujemo i putujemo kao i ranije, da  širimo ideje, znanje i rezultate više off- nego on-line, čestitamo Božić i Novu 2021! Živjeli!

GRAPE-PATH3 tim

Simptomi GLRaV-3 su vidljivi u obliku lisnog crvenila koje se u početku javlja na manjim površinama lista. Širenjem zaraze čitav list postaje crven, dok jedino lisne žile ostaju zelene. Listovi se uvijaju prema svom naličju. Simptomi najprije zahvaćaju starije listove, a kako se zaraza širi, crvenilo i uvijanje listova postaju uočljivi na čitavoj biljci.  

Nakon ljetnog odmora, opet smo u laboratoriju!  Sa suradnicima provodimo morfološke i fiziološke analize na zdravim i GLRaV-3  zaraženim biljkama.  Analiziramo porast biljaka,  permeabilnost membrana, sadržaj vode i nutrienata u listu, enzime i hormone stresa, te još puno toga. Ovo je i vrijeme kada se na biljci mogu jasno razaznati promjene tipične za zarazu GLRaV-3.

Kako bi provjerili uspješnost prijenosa virusa cijepljenjem, u Mikrobiološkom laboratoriju koristili smo ELISA metodu (Engl: Enzyme-linked immunosorbent assay)  za  detekciju GLRaV-3 virusa. Radi se o serološkoj metodi koja omogućuje detekciju virusnih antigena u uzorku ukoliko je titar virusa zadovoljavajući. Iako smo uspješno primijenili metodu, poželjno vrijeme detekcije virusa u biljci je zimski period, a tip uzorka floemsko tkivo rozgve, pa ćemo ovo testiranje ponoviti u zimskom periodu tj u fazi mirovanja vinove loze.

U međuvremenu smo nacijepili manji broj zdravih indikaorskih biljaka, dosad neiskorištenih, s odabranim izolatima GLRaV-3 iz polja. Tip cijepljenja kojeg smo primijenili je “zeleno na zeleno”. Biljke su već nakon dva dana počele razvijati pup iz umetnutog dijela što je garancija prijenosa virusa iz donorske biljke na indikatorskog domaćina.

U drugoj polovici srpnja započeli smo mjeriti fotosintezu na biljkama u pokusu. Nadamo se da će inficirane biljke pokazati razlike u fotosintetskoj aktivnosti u odnosu na kontrolne neinficirane biljke. Također se nadamo da će se pokazati razlike  u aktivnosti fotosinteze  između različitih izolata GLRaV- 3 kao i između različitih domaćinskih biljaka inficiranih istim izolatima.  Značajne…?! Vidjet ćemo.. 🙂